{"id":9645,"date":"2021-01-05T23:29:03","date_gmt":"2021-01-06T04:29:03","guid":{"rendered":"https:\/\/nebula.org\/blog\/secuencia-adn\/"},"modified":"2021-02-20T20:23:02","modified_gmt":"2021-02-21T01:23:02","slug":"secuencia-adn","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/nebula.org\/blog\/es\/secuencia-adn\/","title":{"rendered":"Secuenciaci\u00f3n de ADN: tecnolog\u00edas para leer el c\u00f3digo de la vida"},"content":{"rendered":"\n<h2 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-what-is-dna-sequencing\">\u00bfQu\u00e9 es la secuenciaci\u00f3n de ADN?<\/h2>\n\n<p>La secuenciaci\u00f3n del ADN es un m\u00e9todo para determinar el orden de los nucle\u00f3tidos en un<a href=\"https:\/\/nebula.org\/blog\/es\/acido-adn-desoxirribonucleico\/\"> ADN<\/a> mol\u00e9cula. La secuenciaci\u00f3n del ADN ha revolucionado la gen\u00f3mica. Desde 1995, la secuenciaci\u00f3n del ADN ha hecho posible analizar los genomas de m\u00e1s de 50.000 (hasta 2020) organismos diferentes. <\/p>\n\n<p>Junto con otros m\u00e9todos anal\u00edticos de ADN, esta t\u00e9cnica tambi\u00e9n se utiliza para investigar enfermedades gen\u00e9ticas, entre otras cosas. Adem\u00e1s, en el contexto de la clonaci\u00f3n molecular, la secuenciaci\u00f3n del ADN se ha vuelto indispensable en los laboratorios de biolog\u00eda molecular e ingenier\u00eda gen\u00e9tica.<\/p>\n\n<figure class=\"wp-block-table\"><table class=\"has-subtle-pale-pink-background-color has-background\"><tbody><tr><td><a href=\"https:\/\/nebula.org\/whole-genome-sequencing\/\"><strong>\u00bfEst\u00e1s interesado en decodificar el 100% de tu ADN? \u00a1Nebula Genomics ofrece la secuenciaci\u00f3n del genoma completo m\u00e1s asequible! 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Hoy en d\u00eda, incluso la secuenciaci\u00f3n a gran escala de genomas completos se ha vuelto relativamente r\u00e1pida y f\u00e1cil. <\/p>\n\n<p>Sin embargo, los desaf\u00edos de la secuenciaci\u00f3n del genoma no se limitan solo a la lectura directa de la secuencia de \u00e1cido nucleico. Debido a limitaciones t\u00e9cnicas, solo se leen secciones cortas de ADN (lecturas) de hasta 1000 pares de bases en cada reacci\u00f3n de secuenciaci\u00f3n individual. Para una cadena larga de ADN, en 1979 se utiliz\u00f3 por primera vez un m\u00e9todo conocido como primer caminar. En este procedimiento, la secuencia se ley\u00f3 pieza por pieza.<\/p>\n\n<p>En un proyecto de secuenciaci\u00f3n m\u00e1s grande,<a href=\"https:\/\/www.genome.gov\/human-genome-project\"> Proyecto Genoma Humano<\/a> , se secuenciaron varios miles de millones de pares de bases. Esto se hizo mediante un enfoque conocido como secuenciaci\u00f3n de escopeta. Hoy en d\u00eda, podemos estudiar enfermedades, dianas de f\u00e1rmacos, identificaciones basadas en ADN, etc. Gracias a la tecnolog\u00eda de secuenciaci\u00f3n de ADN masivamente paralela.<\/p>\n\n<p>En la secuenciaci\u00f3n r\u00e1pida, la hebra de ADN se divide primero en fragmentos m\u00e1s peque\u00f1os de nucle\u00f3tidos, que luego se secuencian base por base. La informaci\u00f3n de la secuencia de los segmentos cortos individuales se vuelve a montar en un genoma completo utilizando herramientas bioinform\u00e1ticas.<\/p>\n\n<p>La secuencia de datos brutos se analiza para obtener informaci\u00f3n biol\u00f3gicamente relevante. Sin \u00e9l, cualquier informaci\u00f3n de secuencia queda sin valor cient\u00edfico.<\/p>\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-sequencing-methods\"><strong>M\u00e9todos de secuenciaci\u00f3n<\/strong><\/h2>\n\n<p>Actualmente se encuentran disponibles varios m\u00e9todos para leer la informaci\u00f3n de la secuencia de ADN utilizando m\u00e1quinas de secuenciaci\u00f3n. Durante mucho tiempo, los desarrollos de los m\u00e9todos de secuenciaci\u00f3n se basaron en la secuenciaci\u00f3n de Sanger. Los m\u00e9todos modernos ofrecen posibilidades de secuenciaci\u00f3n acelerada mediante secuenciaci\u00f3n altamente paralela. Los nuevos m\u00e9todos de secuenciaci\u00f3n a menudo se denominan secuenciaci\u00f3n de pr\u00f3xima generaci\u00f3n.<\/p>\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-classical-methods\"><strong>M\u00e9todos cl\u00e1sicos<\/strong><\/h3>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-method-of-maxam-and-gilbert\"><strong>M\u00e9todo de Maxam y Gilbert<\/strong><\/h4>\n\n<p>El m\u00e9todo fue desarrollado por Allan Maxam y Walter Gilbert en 1977. Se basa en dos enfoques. La escisi\u00f3n qu\u00edmica de base espec\u00edfica del ADN y la posterior separaci\u00f3n de los fragmentos mediante electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante. <\/p>\n\n<p>El ADN se marca primero en un extremo 5 &#8216;o 3&#8217; con fosfato radiactivo o una sustancia no radiactiva (biotina, fluoresce\u00edna). En cuatro preparaciones separadas, las bases espec\u00edficas de la columna vertebral de az\u00facar-fosfato del ADN se modifican y escinden parcialmente (de forma limitada). Por ejemplo, la guanina base (G) se metila con el reactivo dimetilsulfato y se elimina mediante tratamiento alcalino con piperidina.<\/p>\n\n<p>Luego, la hebra de ADN se escinde completamente. En cada preparaci\u00f3n, se forman fragmentos de diferentes longitudes, cuyo extremo 3 &#8216;siempre se ha escindido en ciertas bases. La electroforesis en gel de poliacrilamida desnaturalizante separa los fragmentos seg\u00fan la longitud, resolvi\u00e9ndose las diferencias de longitud por una base. Al comparar los cuatro enfoques en el gel, se puede leer la secuencia del ADN. <\/p>\n\n<p>Este m\u00e9todo permiti\u00f3 a sus inventores determinar la secuencia del oper\u00f3n de un genoma bacteriano. Hoy en d\u00eda, el m\u00e9todo rara vez se usa porque requiere reactivos t\u00f3xicos. Adem\u00e1s, es m\u00e1s dif\u00edcil de automatizar que el m\u00e9todo didesoxi de Sanger desarrollado al mismo tiempo.<\/p>\n\n<figure class=\"wp-block-image\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/lh4.googleusercontent.com\/uCg6Zgm2uOGHpyiUDS7Igrzb7G31oM5J0SUj4ogs32EHCEZK0jzoR1bxDYGf8cWtBwTjD25wqKCx3nIWN-gGmCkn66FZweUaOL4pJM9tYA08z9h3NArwrpZ-aqK66bZ11LY5k6Sm\" alt=\"Enfoque de secuenciaci&#xF3;n de Maxam Gilbert.\" title=\"Secuenciaci&#xF3;n de Maxam Gilbert \"\/><figcaption>Enfoque de secuenciaci\u00f3n de Maxam Gilbert. Fuente de la imagen: JHCaufield, Wikimedia Commons<br\/><\/figcaption><\/figure>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-dideoxy-method-sanger-sequencing\"><strong>M\u00e9todo didesoxi (Sanger<\/strong><strong> secuenciaci\u00f3n<\/strong> )<\/h4>\n\n<p>El m\u00e9todo didesoxi de Sanger tambi\u00e9n se denomina s\u00edntesis de terminaci\u00f3n de cadena. Es un m\u00e9todo enzim\u00e1tico. Fue desarrollado por Sanger y Coulson alrededor de 1975. Se present\u00f3 en 1977 con la primera secuencia completa de un genoma (Bacteriophage \u03c6X174).<\/p>\n\n<p>Sanger recibi\u00f3 el Premio Nobel de Qu\u00edmica en 1980 por su trabajo en la secuenciaci\u00f3n del ADN. Recibi\u00f3 el premio junto a Walter Gilbert y Paul Berg.<\/p>\n\n<p>La enzima<a href=\"https:\/\/nebula.org\/blog\/es\/adn-polimerasa\/\"> ADN polimerasa<\/a> se utiliza para alargar una de las dos cadenas de ADN complementarias. La doble h\u00e9lice de ADN se desnaturaliza mediante calentamiento, despu\u00e9s de lo cual las hebras simples est\u00e1n disponibles para su posterior procesamiento. <\/p>\n\n<p>En cuatro preparaciones por lo dem\u00e1s id\u00e9nticas, una de cada una de las cuatro bases se agrega como trifosfato de didesoxinucle\u00f3sido (ddNTP). Estos ddNTP que terminan la cadena no tienen un grupo 3&#8242;-hidroxi para unir el grupo fosfato del siguiente nucle\u00f3tido. Su adici\u00f3n a la cadena reci\u00e9n sintetizada detiene la extensi\u00f3n del ADN por parte de la ADN polimerasa debido a la falta del grupo OH.<\/p>\n\n<p> Como resultado, se producen fragmentos de ADN de diferentes longitudes, que siempre terminan con el mismo ddNTP en cada lote individual. <\/p>\n\n<p>Despu\u00e9s de la reacci\u00f3n de secuenciaci\u00f3n, los productos de rotura marcados de todos los enfoques se separan longitudinalmente mediante electroforesis en gel de poliacrilamida. <\/p>\n\n<p>La secuencia se puede leer luego en una pel\u00edcula fotogr\u00e1fica (pel\u00edcula de rayos X) despu\u00e9s de la exposici\u00f3n del gel radiactivo. La secuencia complementaria correspondiente es la secuencia de la plantilla de ADN monocatenario utilizada. Hoy en d\u00eda, una variaci\u00f3n de la reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR) se utiliza como reacci\u00f3n de secuenciaci\u00f3n. <\/p>\n\n<p>A diferencia de la PCR, solo se usa un cebador, de modo que el ADN solo se amplifica linealmente.<\/p>\n\n<p>A principios de la d\u00e9cada de 1980, Fritz M. Pohl y su grupo de investigaci\u00f3n desarrollaron un m\u00e9todo radiactivo para secuenciar el ADN. En esta tecnolog\u00eda de secuenciaci\u00f3n, las mol\u00e9culas de ADN se transferir\u00edan a un portador durante la separaci\u00f3n electrofor\u00e9tica. <\/p>\n\n<p>El \u00abSistema de electroforesis de transferencia directa GATC 1500\u00bb fue comercializado por la empresa GATC Biotech, con sede en Constance. El secuenciador de ADN se utiliz\u00f3, por ejemplo, en el proyecto europeo del genoma para secuenciar el cromosoma II de la levadura.<em> Saccharomyces cerevisiae<\/em> .<\/p>\n\n<p>Desde principios de la d\u00e9cada de 1990, se han utilizado en particular trifosfatos de didesoxinucle\u00f3sido marcados con tintes fluorescentes. Cada uno de los cuatro ddNTP se acopla con un tinte diferente. Esta modificaci\u00f3n hace posible agregar los cuatro ddNTP en un recipiente de reacci\u00f3n. <\/p>\n\n<p>Ya no es necesario dividir en enfoques separados y manejar radiois\u00f3topos. Los productos de terminaci\u00f3n de cadena resultantes se separan mediante electroforesis capilar y se excitan para que emitan fluorescencia mediante un l\u00e1ser.<\/p>\n\n<p>Los ddNTP al final de cada fragmento de ADN muestran por tanto fluorescencia de diferentes colores. Esta fluorescencia puede ser detectada por un detector. El electroferograma muestra directamente la secuencia de bases de la cadena de ADN secuenciada.<\/p>\n\n<figure class=\"wp-block-image\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/lh5.googleusercontent.com\/yyZ_LR_fZ-94euUL4t6vX5lCWQ1W4uw1VoHq1jMUzzQVpDVHUUNHY9Hj5n_C7-cYtYgBEvwimFWHcva6WeuZNDXQ3OL6S0p62PoS2mO33PGJW-VV4DREdi5hmplZlVvpjkeqtHcW\" alt=\"Un flujo de trabajo t&#xED;pico para la secuenciaci&#xF3;n de Sanger. \" title=\"Secuenciaci&#xF3;n de Sanger\"\/><figcaption>Un flujo de trabajo t\u00edpico para la secuenciaci\u00f3n de Sanger. Fuente de la imagen: Estevezj, Wikimedia Commons<\/figcaption><\/figure>\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-modern-approaches\"><strong>Enfoques modernos<\/strong><\/h3>\n\n<p>Con la creciente importancia de la secuenciaci\u00f3n del ADN en la investigaci\u00f3n y el diagn\u00f3stico, se han desarrollado m\u00e9todos que permiten un mayor rendimiento. Ahora es posible secuenciar el genoma humano completo en aproximadamente 8 d\u00edas. Los m\u00e9todos correspondientes se denominan secuenciaci\u00f3n de segunda generaci\u00f3n.<\/p>\n\n<p> Diferentes empresas han desarrollado m\u00e9todos con diferentes ventajas y desventajas. Aparte de los enumerados aqu\u00ed, hay otros. La secuenciaci\u00f3n de ADN de segunda generaci\u00f3n fue nombrada \u00abm\u00e9todo del a\u00f1o 2007\u00bb por la revista Nature Methods.<\/p>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-dna-sequencing-using-pyrosequencing\"><strong>Secuenciaci\u00f3n de ADN mediante pirosecuenciaci\u00f3n<\/strong><\/h4>\n\n<p>La pirosecuenciaci\u00f3n utiliza una ADN polimerasa para sintetizar la hebra contraria de ADN, aunque el tipo de ADN polimerasa a\u00fan puede variar. <\/p>\n\n<p>La mezcla de ADN se liga con un adaptador de ADN y se acopla a perlas mediante una secuencia adaptadora complementaria. Las perlas cargadas con ADN se colocan en una placa con poros. La detecci\u00f3n depende de un detector de luz.<\/p>\n\n<p>La ADN polimerasa se observa \u00aben acci\u00f3n\u00bb cuando une sucesivamente nucle\u00f3tidos individuales a una cadena de ADN reci\u00e9n sintetizada. La inserci\u00f3n exitosa de un nucle\u00f3tido se convierte en una se\u00f1al luminosa que es detectada por un detector. El ADN que se va a secuenciar sirve como una hebra de matriz y est\u00e1 disponible en forma de hebra \u00fanica. <\/p>\n\n<p>El alargamiento de la cadena de ADN se realiza agregando uno de los cuatro tipos de desoxinucle\u00f3sido trifosfato (dNTP) de forma complementaria. Cuando se agrega el nucle\u00f3tido apropiado, se obtiene una se\u00f1al. La adici\u00f3n de un NTP inadecuado no da como resultado una se\u00f1al detectable. Luego, el NTP existente se destruye y se agrega otro tipo; esto contin\u00faa hasta que se vuelve a mostrar una reacci\u00f3n.<\/p>\n\n<p>Esta es una reacci\u00f3n mediada por la enzima luciferasa. Cuando la ADN polimerasa incorpora un nucle\u00f3tido complementario, se libera pirofosfato (PPi). El pirofosfato se convierte en trifosfato de adenosina (ATP) por la ATP sulfurilasa. <\/p>\n\n<p>El ATP impulsa la reacci\u00f3n de la luciferasa, que convierte la luciferina en oxiluciferina. Esto, a su vez, da como resultado una se\u00f1al de luz detectable, cuya fuerza es proporcional al ATP consumido.<\/p>\n\n<p>La pirosecuenciaci\u00f3n se ha utilizado para determinar la frecuencia de ciertos<a href=\"https:\/\/nebula.org\/blog\/es\/genes\/\"> gene<\/a> mutaciones, por ejemplo, en la investigaci\u00f3n de enfermedades gen\u00e9ticas. La pirosecuenciaci\u00f3n se puede automatizar f\u00e1cilmente y es adecuada para el an\u00e1lisis altamente paralelo de muestras de ADN.<\/p>\n\n<figure class=\"wp-block-image\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/lh3.googleusercontent.com\/wIPpCnxtXE4qvkT4LYJyd0oKdFQwW55iw5ugmZsNTPidcqH39LRzxQZF63dXHox445puAPaxXoRhOSUchzeXNYySxAeriLYE4Hy7WZklh2n8Xu8VghRYLEXjEyryLddCM0_w8Fsr\" alt=\"Pirosecuenciaci&#xF3;n.\" title=\"Pirosecuenciaci&#xF3;n\"\/><figcaption>Pirosecuenciaci\u00f3n. Fuente de la imagen: Thisisjp, Wikimedia Commons<\/figcaption><\/figure>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-sequencing-by-hybridization\"><strong>Secuenciaci\u00f3n por hibridaci\u00f3n<\/strong><\/h4>\n\n<p>Para ello, se fijan secciones cortas de ADN (oligonucle\u00f3tidos) en filas y columnas en un soporte de vidrio (chip de ADN o micromatriz). <\/p>\n\n<p>Los fragmentos del ADN que se van a secuenciar se marcan con tintes y se aplican a la matriz de oligonucle\u00f3tidos. Esto permite que las secciones de ADN libres y fijas complementarias se hibriden entre s\u00ed. Despu\u00e9s de lavar los fragmentos no unidos, se lee el patr\u00f3n de hibridaci\u00f3n de las etiquetas de color y su intensidad. <\/p>\n\n<p>Se conocen las secuencias de los oligonucle\u00f3tidos fijados y sus regiones superpuestas. Por tanto, el patr\u00f3n de color se puede utilizar en \u00faltima instancia para deducir la secuencia global subyacente del ADN desconocido.<\/p>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-ion-semiconductor-dna-sequencing-system\"><strong>Sistema de secuenciaci\u00f3n de ADN semiconductor de iones<\/strong><\/h4>\n\n<p>los<a href=\"https:\/\/www.thermofisher.com\/nl\/en\/home\/brands\/ion-torrent.html\"> Ion Torrent<\/a> El m\u00e9todo utiliza tecnolog\u00eda de chips semiconductores para realizar la secuenciaci\u00f3n directa del genoma no \u00f3ptica utilizando circuitos integrados. <\/p>\n\n<p>Los datos de secuenciaci\u00f3n se obtienen directamente de la detecci\u00f3n de iones producidos por ADN polimerasas dependientes de molde. El chip semiconductor utilizado en este m\u00e9todo tiene un transistor de efecto de campo sensible a los iones. Sus sensores est\u00e1n dispuestos en una cuadr\u00edcula de 1,2 millones de pozos en los que tiene lugar la reacci\u00f3n de la polimerasa. Esta rejilla permite la detecci\u00f3n paralela y simult\u00e1nea de reacciones de secuencia independientes.<\/p>\n\n<p>Se utiliza tecnolog\u00eda complementaria de semiconductores de \u00f3xido de metal (CMOS), que permite una reacci\u00f3n rentable a una alta densidad de puntos de medici\u00f3n.<\/p>\n\n<figure class=\"wp-block-image is-resized\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/lh3.googleusercontent.com\/B5hrNL3q3yWRNkdCVqleutJQGyZQEmuxbKnFM8O5V4kw6OACKVSRhy16Y_xBacwQujfdPgROoem63z0NRuo6IA1u3z4yV66pWlrd5zQmXv_NGn0lAwm4FaDpn4jtYnvQPk1xfG7A\" alt=\"Tecnolog&#xED;a de secuenciaci&#xF3;n de semiconductores de iones, Fuente: Konrad Foerstner, Wikimedia Commons\" width=\"400\" height=\"300\" title=\"secuenciador de semiconductores\"\/><figcaption>Tecnolog\u00eda de secuenciaci\u00f3n de semiconductores de iones, Fuente: Konrad Foerstner, Wikimedia Commons<\/figcaption><\/figure>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-sequencing-with-bridge-synthesis\"><strong>Secuenciaci\u00f3n con s\u00edntesis puente<\/strong><\/h4>\n\n<p>Esta tecnolog\u00eda de secuenciaci\u00f3n se conoce como secuenciaci\u00f3n con s\u00edntesis puente de Solexa \/ Illumina. El ADN de doble hebra que se va a secuenciar se liga en ambos extremos con una secuencia adaptadora diferente en cada extremo. <\/p>\n\n<p>A continuaci\u00f3n, el ADN se desnaturaliza y se liga a una placa de soporte en una forma monocatenaria despu\u00e9s de la diluci\u00f3n. Y amplificado a\u00fan m\u00e1s in situ mediante amplificaci\u00f3n puente. Esto crea \u00e1reas individuales (grupos) de ADN amplificado en la placa portadora, que tienen la misma secuencia dentro de un grupo. <\/p>\n\n<p>La reacci\u00f3n de PCR es con cuatro sustratos de terminaci\u00f3n de cadena fluorescentes de diferentes colores. La base respectiva incorporada por ciclo se determina en tiempo real en un cluster.<\/p>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-two-base-encoding\"><strong>Codificaci\u00f3n de dos bases<\/strong><\/h4>\n\n<p>Secuenciaci\u00f3n por detecci\u00f3n de ligadura de oligo (<a href=\"https:\/\/www.thermofisher.com\/nl\/en\/home\/life-science\/sequencing\/next-generation-sequencing\/solid-next-generation-sequencing\/solid-next-generation-sequencing-systems-reagents-accessories\/solid-next-generation-sequencing-chemistry.html\"> S\u00f3lido<\/a> ) de Applied Biosystems es una variante de Secuenciaci\u00f3n por ligadura. <\/p>\n\n<p>Una biblioteca de ADN se diluye y se acopla a microperlas con una ADN polimerasa. Luego, el ADN se amplifica en una PCR en emulsi\u00f3n. Por tanto, cada microperla contiene varias copias de una \u00fanica secuencia de ADN. Las microperlas se modifican en el extremo 3 &#8216;para que se puedan unir individualmente a una placa portadora.<\/p>\n\n<p> Despu\u00e9s de la uni\u00f3n del cebador, se a\u00f1aden cuatro sondas escindibles diferentes, cada una de las cuales est\u00e1 marcada con un color fluorescente diferente. Se unen a la plantilla de ADN por medio de los dos primeros nucle\u00f3tidos (CA, CT, GG, GC). A continuaci\u00f3n, las microperlas se ligan con una ADN ligasa. A continuaci\u00f3n, las sondas se escinden, liberando as\u00ed las etiquetas. <\/p>\n\n<p>Usando hasta cinco cebadores, cada base en la secuencia de ADN se determina en al menos dos reacciones de ligaci\u00f3n diferentes.<\/p>\n\n<figure class=\"wp-block-image\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/lh4.googleusercontent.com\/-Ea1y8V90klItxRKEcwj3mBlVP3piFANgADdvOBiHBUZWHl6KTORTtpSbhxtefq2Smnrj-jpvbB3i0-jTVHpg-zp6GAweftqJ1ZHbKfraabzfNPZ-0fMZfB8lWdx3IZ7zzt8Ojwr\" alt=\"Plataforma SOLida.\" title=\"Plataforma SOLida\"\/><figcaption>Plataforma SOLiD, fuente de la imagen: Philippe Hupe, Wikimedia Commons<\/figcaption><\/figure>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-dna-sequencing-with-paired-ends\"><strong>Secuenciaci\u00f3n de ADN con extremos emparejados<\/strong><\/h4>\n\n<p>Se puede obtener una se\u00f1al claramente identificable generando fragmentos cortos de ADN a partir de los extremos terminales de una secuencia de ADN. Este m\u00e9todo de secuenciaci\u00f3n de ADN tambi\u00e9n se conoce como secuenciaci\u00f3n de etiquetas de extremos emparejados, PETS.<\/p>\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-third-generation-dna-sequencing\"><strong>Secuenciaci\u00f3n de ADN de tercera generaci\u00f3n<\/strong><\/h3>\n\n<p>Por primera vez, la secuenciaci\u00f3n de tercera generaci\u00f3n mide la reacci\u00f3n en mol\u00e9culas individuales como un experimento de una sola mol\u00e9cula. <\/p>\n\n<p>Esto elimina la necesidad de amplificaci\u00f3n por PCR antes de la secuenciaci\u00f3n. Las polimerasas muestran un sesgo de uni\u00f3n a algunas secuencias de ADN. Por tanto, esto evita la amplificaci\u00f3n desigual por las ADN polimerasas termoestables. <\/p>\n\n<p>Por tanto, se pueden pasar por alto algunas secuencias. Adem\u00e1s, se puede examinar el genoma de una c\u00e9lula individual. <\/p>\n\n<p>La se\u00f1al liberada se registra en tiempo real. En la secuenciaci\u00f3n de ADN de tercera generaci\u00f3n, se registran dos se\u00f1ales diferentes, seg\u00fan el m\u00e9todo utilizado. Son protones o fluor\u00f3foros liberados. La secuenciaci\u00f3n de ADN y ARN de c\u00e9lulas individuales fue nombrada \u00abm\u00e9todo del a\u00f1o 2013\u00bb por la revista Nature Methods.<\/p>\n\n<figure class=\"wp-block-image is-resized\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/lh5.googleusercontent.com\/tTTe7UKvVeAuNV0RVKrh5tbuFfIeC1Uo10tAEqRz-UmkBpp_ejizHvA71b1rtLYy0oEqoikepDYGs16q-t-OGbdVrIeAybSxgPjCwHgbrPWGlBl_piOO4MbRhgwwdPp04Aq_kj9O\" alt=\"Tecnolog&#xED;a de secuenciaci&#xF3;n de tercera generaci&#xF3;n. Fuente de la imagen: Chandra Shekhar Pareek, Rafal Smoczynski, Andrej Tretyn, Wikimedia Commons\" width=\"563\" height=\"386\" title=\"Secuenciaci&#xF3;n de tercera generaci&#xF3;n\"\/><figcaption>Tecnolog\u00eda de secuenciaci\u00f3n de tercera generaci\u00f3n. Fuente de la imagen: Chandra Shekhar Pareek, Rafal Smoczynski, Andrej Tretyn, Wikimedia Commons<\/figcaption><\/figure>\n\n<h4 class=\"wp-block-heading\" id=\"h-nanopore-sequencing\"><strong>Secuenciaci\u00f3n de nanoporos<\/strong><\/h4>\n\n<p><a href=\"https:\/\/nanoporetech.com\/applications\/dna-nanopore-sequencing\">Secuenciaci\u00f3n de nanoporos<\/a> se basa en cambios en el flujo de iones a trav\u00e9s de nanoporos incrustados en una membrana creada artificialmente. Los nanoporos son poros biol\u00f3gicos o sint\u00e9ticos o incluso poros semisint\u00e9ticos. El nanoporo est\u00e1 incrustado en una membrana artificial que tiene una resistencia el\u00e9ctrica particularmente alta. <\/p>\n\n<p>El poro est\u00e1 permanentemente abierto en contraste con los canales i\u00f3nicos ordinarios. Esto permite un flujo constante de iones a trav\u00e9s de la membrana despu\u00e9s de la aplicaci\u00f3n de un potencial. Las mol\u00e9culas de ADN que atraviesan el poro provocan una reducci\u00f3n de la corriente. Esta reducci\u00f3n de corriente tiene una amplitud espec\u00edfica para cada nucle\u00f3tido, que se puede medir y asignar al nucle\u00f3tido correspondiente. <\/p>\n\n<p>En la secuenciaci\u00f3n de una sola hebra, una helicasa separa una hebra de ADN de doble hebra y se introduce en el nanoporo. <\/p>\n\n<p>En el caso de un poro de MspA, cuatro nucle\u00f3tidos del ADN se localizan simult\u00e1neamente dentro del poro. La velocidad de paso depende, entre otras cosas, de la diferencia del valor de pH a trav\u00e9s de la membrana. Los cambios de corriente de iones espec\u00edficos para cada uno de los cuatro nucle\u00f3tidos permiten leer la secuencia. <\/p>\n\n<p>La evaluaci\u00f3n se realiza, por ejemplo, con el software Poretools. La ventaja de este m\u00e9todo es que tiene una precisi\u00f3n constante incluso con cadenas largas de ADN. Se utiliza una variaci\u00f3n del m\u00e9todo para la secuenciaci\u00f3n de prote\u00ednas.<\/p>\n\n<p>La tecnolog\u00eda de secuenciaci\u00f3n de nanoporos est\u00e1 siendo avanzada por la empresa brit\u00e1nica Oxford Nanopore Technologies. Su secuenciador \u00abMinION\u00bb inicialmente solo estaba disponible a trav\u00e9s de un \u00abPrograma de acceso anticipado\u00bb. Pero est\u00e1 disponible a trav\u00e9s de canales de distribuci\u00f3n convencionales desde 2015.<\/p>\n\n<p>Antes de irse, consulte nuestra nueva generaci\u00f3n basada en secuenciaci\u00f3n<a href=\"https:\/\/nebula.org\/whole-genome-sequencing\/\"> Secuenciaci\u00f3n del genoma completo<\/a> !<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>\u00bfQu\u00e9 es la secuenciaci\u00f3n de ADN? La secuenciaci\u00f3n del ADN es un m\u00e9todo para determinar el orden de los nucle\u00f3tidos en un ADN mol\u00e9cula. La secuenciaci\u00f3n del ADN ha revolucionado la gen\u00f3mica. 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